Gemoglobin elektroforezi synag

Synag ýörelgesi

Gemoglobin elektroforezi dürli adaty we adaty bolmadyk gemoglobinleri ýüze çykarmagy we tassyklamagy maksat edinýär.

Dürli gemoglobin görnüşleriniň dürli zarýadlary we izoelektrik nokatlary sebäpli, belli bir pH bufer ergininde, gemoglobiniň izoelektrik nokady bufer ergininiň pH-den pes bolanda, gemoglobin otrisatel zarýad alyp, elektroforez wagtynda anoda tarap süýşýär. Munuň tersine, polo positiveitel zarýadly gemoglobin katoda tarap hereket edýär.

Belli bir naprýa .eniýede we belli bir elektroforez wagtyndan soň dürli zarýadly we molekulýar agramly gemoglobinler dürli göçüş ugurlaryny we tizligini görkezýär. Bu aýratyn zolaklary bölmäge mümkinçilik berýär we dürli gemoglobinleri kesgitlemek üçin bu zolaklarda soňraky kolorimetriki ýa-da elektroforetiki skaner derňewi geçirilip bilner. Iň köp ulanylýan usul pH 8,6 sellýuloza asetat membranasynyň elektroforezi.

Sitoplazmanyň içinde glikogen ýa-da polisakarid maddalarynda bar bolan etilen glikol toparlary (CHOP-CHOH) döwürleýin kislotalar bilen okislenýär we aldegid toparlaryna öwrülýär (CHO-CHO). Bu aldegid toparlary reňksiz gyrmyzy-gyzyl Schiff reagenti bilen birleşip, öýjükde polisakaridleriň ýerleşýän ýerinde goýy gyrmyzy-gyzyl boýag emele getirýär. Bu reaksiýa döwürleýin kislota-Şiff (PAS) boýagy diýlip atlandyrylýar, ozal glikogen boýagy diýilýärdi.

Synag usuly

Materiallar:Sellýuloza asetatmemtormoz, elektroforez enjamy(DYCP-38C we elektrik üpjünçiligi DYY-6C), Iň ýokary nusga ýükleme guraly (turba), spektrofotometr, kolorimetriki kubetler, buferler.

Bufer:

(1) pH 8.6 TEB Bufer: Agramy 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g bor kislotasy we distillendirilen suwy 1000 ml goşuň.

(2) Borat buferi: Agramy 6,87 g boraks we 5,56 gr bor kislotasy we distillirlenen suwy 1000 ml goşuň.

Iş tertibi:

Pgemoglobin çözgüdiniň öwezini dolmak

Antikoagulyant hökmünde heparin ýa-da natriý sitraty öz içine alýan 3 ml gany alyň. 2000 minutda sentrifuga 10 minutlap plazmany taşlaň. Gyzyl gan öýjüklerini fiziologiki duz bilen üç gezek ýuwuň (750 aýlaw, her gezek 5 minut sentrifugasiýa). Merkezden gaçyryş 2200 aýlawda 10 minutlap, adatdan daşary tebigaty taşlaň. Deň mukdarda distillendirilen suw goşuň, soňra uglerod tetrahloridiniň mukdaryndan 0,5 esse goşuň. 5 minutlap güýçli silkäň, soňra bolsa ulanmak üçin ýokarky Hb erginini ýygnamak üçin 10 minutda 2200 aýlawda sentrifuga.

Membranany siňdirmek

Sellýuloza asetat membranasyny 3 sm × 8 sm ölçegdäki zolaklara kesiň. Olary pH 8.6 TEB buferine doly doýýança siňdiriň, soňra süzgüç kagyzy bilen guradyň.

Tapawut

Gemoglobin ergininiň 10 μl, sellýuloza asetat membranasyna (gödek tarapy) gyrasyndan 1,5 sm uzaklykda dik durmak üçin turbany ulanyň.

Elektroforez

Borat bufer erginini elektroforez kamerasyna guýuň. Sellýuloza asetat membranasyny otagyň katod ujunda tegmilli tarapy bilen ýerleşdiriň. 200 V-de 30 minut ylgaň.

Elution

HbA we HbA2 zolaklaryny kesiň, aýratyn synag turbalaryna ýerleşdiriň we degişlilikde 15 ml we 3 ml distillendirilen suw goşuň. Gemoglobini doly ýok etmek üçin ýuwaşja silkäň, soňra garmaly.

Kolorimetriýa

Elýusiýa ergini üçin distillendirilen suwy ulanyp, siňdirişi nol we 415 nm-de ölçemäni ölçäň.

Hasaplama

HbA2 (%) = HbA2 turbasynyň siňdirilmegi / (HbA turbasynyň siňdirilmegi × 5 + HbA2 turbasynyň siňdirilmegi) × 100%

Synag netijelerini hasaplamak

PH 8.6 TEB bufer sellýuloza asetat elektroforezi üçin salgylanma aralygy: HbA> 95%, HbA2 1% -3.1%

Bellikler

Elektroforez wagty gaty uzyn bolmaly däldir. Sellýuloza asetat membranasy elektroforez wagtynda guramaly däldir. HbA we HbA2 aç-açan aýrylanda elektroforezi bes ediň. Uzak wagtlap dowam eden elektroforez, zolagyň ýaýramagyna we bulaşmagyna sebäp bolup biler.

Gaty köp nusga ulanmakdan gaça duruň. Artykmaç gemoglobin suwuklygy, HbA derejesiniň galp ýokarlanmagyna sebäp bolup, zolagyň bölünmegine ýa-da ýeterlik boýaglara sebäp bolup biler.

Sellýuloza asetat membranasynyň beloklar bilen hapalanmagynyň öňüni alyň.

Tok gaty ýokary bolmaly däldir; bolmasa, gemoglobin zolaklary aýrylyp bilmez.

Elmydama adaty adamlardan alnan nusgalary we gözegçilik hökmünde zerur bolan adaty bolmadyk gemoglobinleri goşuň.

Pekin Liuyi Biotehnologiýasy, gemoglobin elektroforezi üçin professional elektroforez tanky öndürýärDYCP-38Csellýuloza asetat membranasynyň elektroforez tanky, we sellýuloza asetat membranasynyň elektroforez tanky üçin iki sany elektroforez elektrik üpjünçiliginiň bar;DYY-2CweDYY-6Celektrik üpjünçiligi.

Bu aralykda, Pekin Liuyi biotehnologiýasy müşderiler üçin sellýuloza asetat membranasyny üpjün edýär we sellýuloza asetat membranasynyň ululygy düzülip bilner. Nusgalar we has giňişleýin maglumat soramagyňyzy haýyş edýäris.

Pekin Liuyi markasynyň Hytaýda 50 ýyldan gowrak taryhy bar we bu kompaniýa bütin dünýäde durnukly we ýokary hilli önümler bilen üpjün edip biler. Birnäçe ýyllyk ösüşiň dowamynda, bu siziň saýlamagyňyzdyr!

Indi hyzmatdaş gözleýäris, OEM elektroforez tanky we paýlaýjylar garşylanýar.

Önümlerimiz üçin satyn alyş meýilnamaňyz bar bolsa, biziň bilen habarlaşmakdan çekinmäň. Bize e-poçta arkaly habar iberip bilersiňiz[e-poçta goralýar]ýa-da[e-poçta goralýar], ýa-da bize +86 15810650221 jaň edip ýa-da Whatsapp +86 15810650221 ýa-da Wechat: 15810650221 goşuň